2024年5月16日　ジョン＝マイケル・デュメイ

査読を受けた新しい研究が、COVID-19 mRNAワクチンのDNA不純物を測定するための不十分な検査方法に対する懸念を提起している。ゲノミクスの専門家であるケビン・マッカーナンは、この研究の方法を批評しているが、汚染は依然として許容限度を超えており、現在の規制は 「全く目的に合っていない 」と主張している。

ファイザー社とBioNTech社が製造したコミルナティCOVID-19 mRNAワクチンに含まれるDNA不純物の可能性を検査する方法について、査読を受けた新しい研究が懸念を示している。

今月『Methods and Protocols』誌に発表された研究において、ドイツの研究者Brigitte KönigとJürgen O. Kirchnerは、ファイザー社とBioNTech社がワクチン活性物質中のDNA汚染を測定するために使用した定量的PCR（qPCR）技術の信頼性に疑問を呈した。

研究者らはコミルナティの脂質ナノ粒子を溶解して実験した。その結果、世界的に規制当局が設定している1回あたりの投与量10ng（ナノグラム）の制限値より360倍から534倍高いDNA不純物レベルが検出された。

研究者らは、蛍光分光法を用いることで、最終的な使用済みワクチン製品に存在するDNA汚染の総レベルをより確実に定量化できると提案した。

メディシナル・ゲノミクス社のケビン・マッカーナン最高科学責任者兼創業者は、『ディフェンダー』紙に対し、著者らはCOVID-19 mRNAワクチンのDNA汚染に関していくつかの重要な点を指摘しているが、蛍光色素は信頼性が低く、測定値が過大になる可能性があると述べた。

DNA不純物の大規模な検出不足

ファイザー／BioNTechのようなメーカーは、脂質ナノ粒子と結合する前のワクチン活性物質にqPCR法を適用したDNA汚染検査を行っている。

ケーニッヒとキルヒナーは、qPCR検査はmRNAワクチンを製造するために使用される7,824塩基対のDNAテンプレートのうち、69塩基対のわずかな部分しか検査しないと指摘した。

つまり、ファイザー社がチェックするのはオリジナルテンプレートの1％以下ということになる。残りの99％は分析されないため、「DNA不純物の検出率が大幅に低下する」と研究者たちは述べている。

研究者らはまた、この小さな断片が酵素消化の過程でDNA鋳型断片の残りの部分と異なる割合で破壊され、正確な測定をさらに混乱させる可能性があるとも主張している。

もう一つの複雑な要因は、qPCR標的配列が、mRNAの産生に使われるT7プロモーターと呼ばれるDNA部分と重なっていることである。細胞の機械や副産物がこのプロモーター領域に結合し、qPCR検査で検出されないようにする可能性がある。

マッカーナンらと共同で、モデルナ社およびファイザー社のCOVID-19ワクチンに含まれるDNA断片に関するプレプリント研究を行ったデイビッド・スピーカー博士も同様の懸念を表明している。

PCR法は、使用されたプライマーが標的とする特定のDNA/RNA配列のみを定量することができる、と彼は『ディフェンダー』紙に語った。その標的配列に切断や変異があれば、「DNAは増幅されず、負荷量は過小報告される」。

「ワクチンに含まれるDNAはプラスミドに由来するものであり、細菌やその他のソースに由来するものではないという仮定もあります」とシュパイヒャー氏は言う。

マッカーナンはもう一つの問題を指摘した。 規制当局はファイザー社がDNAの測定にqPCRを、RNAの測定にフルオロメトリーを使用することを認めている。

「EMA（欧州医薬品庁）の規制はRNA：DNAの比測定です。「RNAはインチ、DNAはメートルで測定すべきではありません」。

彼は、ファイザー社はRNAとDNAの両方をフルオロメトリーかqPCRで測定すべきだと述べた。「このようなツールを混ぜて使うことを許せば、あからさまなごまかしが可能になる。

マッカーナンはまた、qPCRが小さなDNA断片の測定には不適当であることを認めるモデルナの特許出願の一部を紹介した。

「我々はもはや、注射が汚染されているかどうかを議論しているのではない」。

汚染DNAのごく一部しか対象としないqPCRの落とし穴を避けるため、ケーニッヒとキルヒナーはQubitのような蛍光分光法を用いて最終ワクチン製品中の総DNAレベルを定量化することを提案した。

これらの方法はDNAやRNAのような核酸に特異的に結合する蛍光色素を用いる。

彼らがコミルナティを用いて蛍光技術を用いた実験では、ナノ粒子を分解した後、10ng/doseの限界値を大幅に上回るDNA混入が確認された。

図2. ワクチン製剤に含まれる脂質ナノ粒子を崩壊させるための洗浄剤としてTriton-X-100を添加しない場合と添加した場合の、Qubit蛍光光度計を用いたComirnatyのバッチにおける全DNAの定量。Credit: Brigitte König and Jürgen O. Kirchner.
https://www.mdpi.com/2409-9279/7/3/41

マッカーナンは、自身のSubstackで蛍光測定の限界について書いているが、ケーニッヒとキルヒナーの結果を考慮する際には注意を促した。

「蛍光染料はRNAとDNAの間でクロストークを起こす可能性があり、ワクチン中に存在する大量のRNAがDNA特異的染料を誘発し、RNAからのシグナルを提供することになる。このことが、ケーニッヒの論文におけるDNAの測定値を大きくしているのです」。

この懸念に対処するために、マッカーナンは研究者たちがRNaseコントロールを行うべきだと述べた。RNアーゼはRNAを消去する酵素であり、DNAを測定する際にRNAによる妨害はない。

このコントロールがなければ、ケーニッヒとキルヒナーは「批評家にとって攻撃しやすい表面を残してしまった」ことになる。

出版準備中の研究の中で、マッカーナンによれば、RNアーゼ実験を行っているいくつかの研究室では、フルオロメトリーを使用した場合、DNAシグナルが10倍減少することが観察されたという。

「これでもDNA汚染はFDA（米国食品医薬品局）の制限値をはるかに超えています」とマッカーナンは言う。マッカーナン氏は、この研究に対する彼の 「毛嫌いするような批判 」は、mRNAワクチンのDNA汚染検査プロトコルを再評価するという呼びかけを弱めたり、頓挫させるものではないと強調した。

「我々はもはや、予防注射が汚染されているかどうかを議論しているのではありません。10倍なのか100倍なのか、ロットによってどの程度違うのかを議論しているだけです」。

DNA汚染の潜在的リスク

ケーニッヒとキルヒナーは、予想以上のDNA汚染がワクチン接種中にヒト細胞内に取り込まれ、そのDNAがゲノムに組み込まれた場合、未知の結果をもたらす可能性があることを懸念した。

この場合、外来DNAがゲノムに挿入されると正常な遺伝子配列が破壊され、突然変異やそれに伴う癌のような病気を引き起こす可能性がある。

マッカーナンのような研究者はすでに、COVID-19ワクチンのmRNAに含まれるDNAには、シミアンウイルス40（SV40）のがん促進遺伝子と、ワクチン製造工程で残った大腸菌プラスミドDNA配列が含まれていることを突き止めた。

国際危機サミット-5会議での2月のプレゼンテーションで、マッカーナンは、COVID-19 mRNAワクチンに関するモデルナの特許出願が、挿入突然変異誘発のリスクを認めていることを指摘した。

【訳】
治療薬やバイオ加工用途の両方で効果的なタンパク質発現を達成するために、医薬組成物を送達する従来の方法論には複数の問題がある。例えば、導入されたDNAはある頻度で宿主細胞のゲノムDNAに組み込まれ、その結果、宿主細胞のゲノムDNAに変化や損傷をもたらす可能性がある。あるいは、細胞に導入された異種デオキシリボ核酸（DNA）は、娘細胞（異種DNAが染色体に組み込まれたかどうかにかかわらず）または子孫に遺伝する可能性がある。
さらに、導入された後、コードされたタンパク質が作られるまでに、タンパク質の発現に影響を与える複数の段階が必要である。DNAは細胞内に入ると、

同特許出願では、DNAの混入が癌を引き起こす可能性があるとしている。

「mRNAの製造工程で使用されるDNAテンプレートは、治療薬の有効性と安全性を確保するために除去されなければならない」。なぜなら、医薬品に残存するDNAは自然反応の活性化を誘発する可能性があり、患者集団において発癌性の可能性があるからである。

マッカーナンは国際危機サミットのプレゼンテーションで、「私たちは常にキャンセルしている 」と断言した。彼は、mRNAワクチンの健康への悪影響について、次のような 「3ヒット仮説 」を提唱した。

1. 1.dsDNA（二本鎖DNA）プラスミド汚染による突然変異誘発の増加。

2. RNAを安定化させるために使用されるN1-メチル-シュードウリジンの影響で、リンパ球減少、好中球減少、IgG4関連疾患などを引き起こす。

3. ゲノムの守護神」であるP53およびBRCA1腫瘍抑制遺伝子の阻害。

DNA汚染規制は「全く目的に合わない」

マッカーナンは、ワクチンへのDNA混入の許容限度を規定する現行の規制は 「全く目的に合わない 」と強調した。

「DNA汚染ガイドラインは、血液中の裸のDNAの半減期を5-10分と想定している。このDNAが脂質ナノ粒子によって保護されると、もはや裸ではなく、分解されることなく、細胞をトランスフェクションする」。

マッカーナンによれば、哺乳類ベースのDNA断片は、「それ自身をさらに作るように設計された高度に複製可能な遺伝子治療ベクター 」の一部であり、したがって、一度トランスフェクションされれば、無期限に自己増幅することができる。

「もし製薬会社が増幅可能なDNA分子をこっそり規制を通過させることができるのであれば、10ngという制限に何の意味があるのでしょうか？」

規制当局は1998年に10ng/doseのDNA汚染許容量を設定した。

「10ngというのは細胞外を考慮したものです」と、Children's Health Defenseのシニア・リサーチ・サイエンティスト、カール・ジャブロノウスキー博士は言う。「核内にどれだけの外来DNAが許容されるべきかと言えば、答えはゼロです」と彼は『ディフェンダー』誌に語った。

シュパイヒャー氏は、規制当局は200塩基対以下の断片は無視している、と付け加えた。

ヒトゲノム全体のDNAは平均6.41pc（ピコグラム）であることから、ジャブロノフスキーは「10ngのDNAは我々の全ゲノムの1560倍に相当する」と指摘した。

ヒトゲノムに対してどこまで無謀なことができるのか？

起こりうる限界にもかかわらず、欧州の規制当局は、コミルナティが10ng/投与という必要なDNA汚染限界値を満たしているかどうかをチェックするためのqPCR法を承認した。

ケーニッヒとキルヒナーによれば、有効成分に関するメーカーのqPCR試験以外に、「ワクチンに関してそれ以上の実験的DNA定量は行われていない」。

規制当局は、mRNAを封入した脂質ナノ粒子による干渉の可能性を理由に、最終製品のテストは実行不可能だと主張している。

しかし、研究者たちは、製造業者は同じナノ粒子内のmRNAを正確に定量できると指摘した。研究者らは、規制当局がメーカーの限られたqPCRデータに依存し、最終的なComirnaty製品中の全DNAの直接定量を義務付けていないことを批判した。

他の科学者がマッカーナンの研究を再現した後、FDA、EMA、カナダ保健省などの規制機関は、ファイザーのワクチンにSV40が含まれていることを認めざるを得なくなった。

しかし、マッカーナンによれば、これらの機関は、DNA断片の長さも量も少なすぎて機能的ではないとしており、さらに規制を強めたり、ワクチンを市場から撤去したりする措置はとっていないという。

マッカーナンはまた、1986年の全米小児ワクチン傷害法（NCVIA）以前は、DNA汚染限界は現在の10ngより1000倍低かったと指摘した。

この規制緩和は、NCVIAの責任シールドや技術の進歩とともに、DNAシークエンシング技術を「10万倍安く」し、ワクチン会社が「（LNPのような）トランスフェクション試薬」を追加することを可能にした。

マッカーナンは次のように語った。

なぜFDAはワクチンの塩基配列を決定しないのか？何十億人もの人々に注射する予定のワクチンに含まれるDNAやRNAのすべての分子の正確な配列と頻度を知らないという言い訳があるだろうか？彼らはヒトゲノムに対してどれほど無謀なことができるのだろうか？

マッカーナンによれば、当局の不作為にもかかわらず、カナダ市民が最近行った情報公開法（Freedom of Information Act）の要求により、「舞台裏での驚くべき活動」が明らかになったという。

マッカーナンは、「規制当局は、汚染について心配する必要はないと国民に言っていますが、このDNAを除去するために内部で奔走しています」と語った。